本实验室应用的Folin-酚试剂为北京某某昌盛生物技术有限公司生产，效果尚可，该公司生产的BCA蛋白定量试剂盒比Folin-酚试剂检测更精确，且不受绝大部分样品中的化学物质的影响，对于蛋白纯化样本含量测定来说更加适合。

1、Folin-酚法（Lowry法）原理：

  这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原，产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物）。在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。

2、技术指标：

  本试剂盒可测定蛋白浓度0.05--1mg/ml。当蛋白浓度范围在0.05-0.5mg/ml范围时，线性关系最好。标准曲线相关系数：R2大于0.99.

3、试剂盒组分：

 1.Folin—酚试剂甲

溶液I：2g无水碳酸钠和20mg酒石酸钠溶于100ml 0.2mol/l氢氧化钠中（已配制成5×，用时稀释5倍，使用完需另配)。

溶液Ⅱ：0.5g五水硫酸铜溶于100ml水溶液。

将稀释后的溶液I与溶液Ⅱ，以50：1的比例混合，混合后即为Folin—酚试剂甲，此试剂只能用一天，过期失效。

  2.Folin—酚试剂乙

原液浓度为2moL/L使用前需稀释一倍，用多少稀释多少。使其最后浓度为1moL/L。此为Folin—酚试剂乙应用液。Folin—酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。

4、操作方法：

  标准曲线的制作

  取14支试管分成两组，按下表顺序加入试剂，混匀，于室温放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙，立即摇匀，在室温放置30分钟，然后于500nm处比色。测定光密度值。取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线为定量的依据。

试剂/管号0123456

BSA/ml(250ug/ml00.10.20.40.60.81.0

蒸馏水/ml1.00.90.80.60.40.20

试剂甲/ml5555555

试剂乙/ml0.50.50.50.50.50.50.5

样品测定：

（1）取1毫升样品溶液（约含20-250微克多肽或蛋白质）加入5毫升试剂甲混匀，于室温放置10分钟。

（2）加入0.5毫升试剂乙（folin—酚），立即摇匀，于室温保温30分钟；然后500nm（根据使用情况）处比色，以1毫升水代替样品作空白对照。测定后，可以从标准曲线中查出未知样品浓度。

  若用0.5厘米光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取0.2毫升样品溶液（约含5-100微克多肽或蛋白质），加入1毫升试剂甲（可选用0.3-0.5厘米直径的小试管）混匀，10分钟以后，再加入0.1毫升试剂乙，立即混匀，30分钟后比色，一般来说，若多肽或蛋白质浓度在2-25微克，则采用波长755nm,而25微克以上则采用500nm比色为宜（波长选择依使用情况）。

样本1样本2样本3

试剂/管号0123456789

BSA/ml(250ug/ml)或样本00.020.040.080.120.160.20.20.20.2

蒸馏水/ml0.20.180.160.120.080.040000

试剂甲/ml1111111111

试剂乙/ml0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1

测值1

测值2

计算Pr=

紫外分光光度计测Pr=

500nm波长